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大鼠低氧誘導因子1αelisa試劑盒的正確使用步驟分享

  • 更新時間:2025-02-24      瀏覽次數(shù):378
    •   大鼠低氧誘導因子1αelisa試劑盒采用ELISA技術(shù),通過雙抗體夾心法或競爭法,利用純化的抗體包被微孔板,與待測樣品中的HIF-1α特異性結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,再經(jīng)過洗滌、顯色和終止反應等步驟,通過酶標儀測定吸光度來計算樣品中HIF-1α的濃度。
       
        為確保實驗結(jié)果的準確性,正確使用大鼠低氧誘導因子1αelisa試劑盒至關(guān)重要。以下是詳細的使用步驟:
       

       

        一、實驗前準備
       
        1、試劑盒檢查:確認試劑盒包含標準品、檢測抗體、酶結(jié)合物、底物、終止液、洗滌液等,并檢查是否在有效期內(nèi)。
       
        2、樣本準備:采集大鼠組織或細胞樣本,按要求處理(如勻漿、離心)并保存于-80°C。
       
        3、試劑平衡:將試劑盒從冰箱取出,室溫平衡30分鐘。
       
        4、儀器準備:確保酶標儀、移液器、離心機等設備正常工作。
       
        二、實驗步驟
       
        1、標準品稀釋:按說明書將標準品梯度稀釋,通常設置6-8個濃度點。
       
        2、加樣:將標準品和樣本加入酶標板孔中,每孔100μL,設置空白對照。
       
        3、孵育:37°C孵育1-2小時,使HIF-1α與包被抗體結(jié)合。
       
        4、洗滌:棄去孔內(nèi)液體,加入洗滌液,靜置30秒后棄去,重復3-5次。
       
        5、加檢測抗體:每孔加入100μL生物素標記的檢測抗體,37°C孵育1小時。
       
        6、洗滌:重復洗滌步驟。
       
        7、加酶結(jié)合物:每孔加入100μL酶結(jié)合物,37°C孵育30分鐘。
       
        8、洗滌:再次洗滌。
       
        9、加底物:每孔加入100μL底物溶液,避光孵育15-30分鐘。
       
        10、終止反應:每孔加入50μL終止液,顏色由藍變黃。
       
        11、讀數(shù):用酶標儀在450nm波長下測定吸光度。
       
        三、數(shù)據(jù)分析
       
        1、繪制標準曲線:以標準品濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線。
       
        2、計算樣本濃度:根據(jù)標準曲線計算樣本中HIF-1α的濃度。
       
        四、注意事項
       
        1、操作規(guī)范:避免污染,使用一次性吸頭。
       
        2、時間控制:嚴格控制孵育和洗滌時間。
       
        3、儀器校準:確保酶標儀和移液器準確。
       
        4、重復實驗:每個樣本至少做3次重復,確保結(jié)果可靠。
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